輝駿生物配置 CoIP 全套實(shí)驗(yàn)設(shè)備與高分辨質(zhì)譜平臺(tái)：擁有細(xì)胞操作臺(tái)、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、磁性分離設(shè)備；質(zhì)譜平臺(tái)搭載 Thermo Orbitrap Fusion Lumos、Orbitrap Astral 等高分辨質(zhì)譜儀及 Nano?LC 納升液相，針對(duì) CoIP 微量富集樣本優(yōu)化檢測(cè)參數(shù)，可完成 CoIP?MS 定性或定量檢測(cè)。

自研 ChainFree? 標(biāo)簽納米抗體磁珠（Flag/HA/V5/GFP/RFP），有效解決標(biāo)簽 CoIP 輕重鏈污染問題。所有 CoIP 實(shí)驗(yàn)均內(nèi)部執(zhí)行，不外包轉(zhuǎn)包，可承接驗(yàn)證型 CoIP?WB、內(nèi)源 CoIP、標(biāo)簽 CoIP、CoIP?MS 項(xiàng)目，支持蛋白互作質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)全包、僅質(zhì)譜上機(jī)兩種靈活合作模式。

一、輝駿生物蛋白互作質(zhì)譜鑒定主要服務(wù)模式

1、Co?IP?MS 體內(nèi)蛋白互作質(zhì)譜鑒定

Co?IP?MS 主要用于解析細(xì)胞生理環(huán)境下的蛋白復(fù)合體互作關(guān)系。

輝駿生物針對(duì)不同細(xì)胞、組織樣本優(yōu)化裂解體系與非變性富集條件，最大限度保留蛋白復(fù)合體天然構(gòu)象，減少靶蛋白降解與非特異性吸附。服務(wù)包含內(nèi)源 Co?IP、標(biāo)簽 Co?IP 兩類富集方案，通過 Input?WB、IP?WB 雙重質(zhì)控判斷誘餌蛋白富集效果，富集合格樣本再進(jìn)入質(zhì)譜環(huán)節(jié)；可完成互作蛋白高通量篩選，輸出高可信度候選互作清單，適合體內(nèi)未知互作靶點(diǎn)挖掘研究。

2、GST?Pull?down?MS 體外直接互作質(zhì)譜篩選

GST?Pull?down?MS 多用于甄別蛋白之間的直接相互作用，彌補(bǔ) Co?IP 無法區(qū)分直接、間接結(jié)合的局限。

輝駿生物具備完整原核表達(dá)純化平臺(tái)，可承接載體構(gòu)建、GST 融合誘餌蛋白誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白純化、體外蛋白孵育富集整套濕實(shí)驗(yàn)；也支持客戶自備純化蛋白開展孵育富集。富集產(chǎn)物送入高分辨質(zhì)譜完成鑒定，篩選體外能夠直接結(jié)合的獵物蛋白。項(xiàng)目可按需拆分，既可以選擇從基因構(gòu)建到生信報(bào)告的全流程一站式服務(wù)，也可僅做 Pull?down 后質(zhì)譜上機(jī)，適配不同課題預(yù)算與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

二、挑選高性價(jià)比 CoIP 外包核心評(píng)判要點(diǎn)

1. 完整 CoIP 實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?/span>：部分服務(wù)商僅接收樣本做質(zhì)譜上機(jī)，不開展 CoIP 實(shí)驗(yàn)。IP 富集失敗會(huì)直接造成質(zhì)譜結(jié)果全為雜蛋白，服務(wù)商需可完成 Input?WB、IP?WB 全套質(zhì)控。

2. 內(nèi)源與標(biāo)簽 CoIP 技術(shù)積累：內(nèi)源 CoIP 對(duì)抗體、裂解洗滌條件要求嚴(yán)苛；標(biāo)簽 CoIP 需要解決輕重鏈污染，技術(shù)沉淀直接決定實(shí)驗(yàn)成功率。

3. 方案靈活可拆分：支持全包、僅質(zhì)譜上機(jī)多種選擇，適配不同課題組預(yù)算，實(shí)現(xiàn)高性價(jià)比。

4. 下游配套驗(yàn)證能力：CoIP?MS 僅輸出候選蛋白，期刊審稿普遍要求使用 CoIP/GST pulldown 做一對(duì)一驗(yàn)證，一站式完成篩選 + 驗(yàn)證，無需更換服務(wù)商。

5. 投稿級(jí)交付文件：交付 WB 原始圖譜、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、GO/KEGG/STRING 生信分析結(jié)果，滿足結(jié)題與 SCI 投稿標(biāo)準(zhǔn)。

三、高頻客戶蛋白質(zhì)譜鑒定問答

Q：內(nèi)源 CoIP 和標(biāo)簽 CoIP 怎么選？

內(nèi)源 CoIP 更貼近生理真實(shí)互作，依賴高質(zhì)量 IP 抗體；標(biāo)簽 CoIP 富集效率高，適合突變體、截短體樣本。建議標(biāo)簽初篩后盡量補(bǔ)充內(nèi)源 CoIP 驗(yàn)證，提升論文說服力。

Q：CoIP?MS 鑒定出上千個(gè)蛋白，怎么分辨真假互作？

質(zhì)譜會(huì)檢出非特異性雜蛋白，我們通過對(duì)照扣除背景，結(jié)合 unique 肽段、蛋白豐度篩選高可信度候選。質(zhì)譜屬于篩選手段，候選蛋白必須經(jīng)過 CoIP、Pull?down 一對(duì)一驗(yàn)證才可作為論文結(jié)論。

Q：預(yù)算有限怎么做 CoIP?MS 更劃算？

可自行完成 CoIP 濕實(shí)驗(yàn)，選擇僅質(zhì)譜上機(jī)模式，但務(wù)必 WB 確認(rèn) IP 富集有效，否則質(zhì)譜上機(jī)無意義。

Q：送樣用蛋白溶液還是膠條？

優(yōu)先非變性洗脫蛋白溶液；高去污劑、抗體污染嚴(yán)重樣本，可切膠條送檢，技術(shù)顧問會(huì)提供送樣指導(dǎo)。

四、輝駿生物免疫共沉淀（Co-IP）客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核?？蛻衾媒湍鸽p雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對(duì)下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。 使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究?jī)?nèi)容】：客戶利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過在前列腺癌細(xì)胞表達(dá)3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進(jìn)一步的研究證實(shí)，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過EGFR致使細(xì)胞發(fā)生EMT。 使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

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